主頁 > 新聞動態 > 行業新聞 >

(蠕動泵說明書)AKTA層析系統標準操作規程淺談

時間:2021-06-09 14:31 點擊:
在使用AKTA前,請先閱讀本規程,并了解所需層析方法的
原理。初次使用請在有經驗的人指導下進行。 
一. 緩沖液和層析的樣品的準備: 
1. 溶液需用去離子水、超純水或注射用水配制,除NaOH和乙醇外,所有
用于層析的緩沖液需經0.45μm孔徑的濾膜過濾,并盛裝于用0.45μm孔徑濾膜過濾的水**少蕩洗4次的容器中。 
2. 實驗過程中用到的20%乙醇應用新的無水乙醇和0.45μm孔徑濾膜過濾的
水配制;0.1M NaOH用0.45μm孔徑濾膜過濾的水和固體NaOH配制。 3. 盛裝緩沖液的應使用小口有蓋圓底容器,**好可滅菌,如藍口瓶,無水
乙醇瓶。燒杯(敞口,易污染長菌)、血清瓶(多死角,易長菌)不適合用于盛裝緩沖液。 
4. 配制的緩沖液成分不宜濃度過高,如硫銨不得超過2M(約50%飽和硫銨);
NaCl不得超過4M;PB不得超過500mM;以免析出固體損壞層析介質與儀器。 
5. 緩沖液要多次使用,需在120℃滅菌20min,此后置于4℃保存,下回層
析時平衡**室溫使用,使用前應搖晃無可見異物方可使用,否則,應重新過濾。 
6. 用于層析的樣品通常要用12000rpm離心10min,上清用0.22μm過濾后才
可以用于層析。經過層析后收集的樣品如無沉淀可免去離心和過濾的步驟。7. 用于離子,疏水層析的樣品應經預實驗不會在該層析條件下樣品在低鹽
和高鹽條件下穩定不析出沉淀。 
二. AKTA儀器的使用: 
1.開關機 
⑴開啟電腦,檢查電腦運行狀態是否正常。 
⑵開啟AKTA總電源按鈕(AKTA儀器一般分為2-3個模塊,每個模塊有單獨的電源開關,通常為開啟狀態,總電源開關一般用于開關儀器),稍后開啟AKTA控制軟件UNICORN,并等待儀器自檢和聯機,每個模塊自檢成功后會發出“嘀---嘀嘀”的聲音,相應在儀器上顯示自檢通過的字樣。軟件開啟后會同時打開4個界面,從左到右依次是:文件管理界面、程序編輯界面,儀器控制界面,圖線分析界面。與儀器連接成功后,儀器控制界面下方儀器簡圖線路變成綠色,儀器會從泵內走一段液體**廢液。如未連接成功,操作界面會彈出提示窗口,此時請檢查儀器與電腦數據線插頭是否松動,而后關閉儀器和程序,重新開啟,必要時可重新啟動電腦。如經過以上步驟還無法連接,請聯系管理員。 
⑶使用完儀器應在文件管理界面關閉UNICORN程序,系統將提示是否鎖定界面,選否,待UNICORN完全退出后方可關閉儀器電源。使用完畢后需清理臺面,并登記使用事項。 2.AKTA儀器的運行⑴在打開流速之前,將AB管道插入緩沖液中,遵循A低鹽,B高鹽或者A高pH, B低pH的原則,若只用一種緩沖液,請將AB管道都插入緩沖液中,然后AB泵各走50%。在裝上柱子之前應先用高流速將管道中替換成自己相應緩沖液。 
⑵若樣品量低于10mL,用上樣環進樣比較簡便和準確。選用合適上樣環,在裝柱前連接上儀器,在清洗管道時調**inject一并清洗,并且裝上層析柱后隨柱子一起平衡。上樣時,先在inject下插入注射器,調**load,打入緩沖液,改為inject,上樣。 
⑶在儀器控制界面可通過電腦控制流速,A/B泵流速比例,上樣環狀態切換,UV歸零,壓力上限,以及標注和定時暫停等。流速和壓力控制要按照不同的介質、柱型號的使用方法嚴格嚴格執行(參數見附表)。特別需要注意的是,在使用時要設定**高壓力警報,以避免操作不當造成柱子爆裂,甚**儀器損壞。AKTA使用過程中請檢查各部分的運行情況,如有問題及時聯系管理員。 
⑷同時,在使用時,請確保位于儀器一側的,50mL管裝的20%乙醇正在循環流動(用于清洗壓力泵),并且20%乙醇無渾濁或干涸現象。若發生斷流或液體渾濁,請及時更換并用注射器抽取,讓液體充滿管道,避免對壓力泵造成損害。 
⑸使用NaOH以及鹽濃度較高的緩沖液清洗管道或柱子時盡量減少漏液,如漏到儀器上時請及時擦拭干凈,避免腐蝕AKTA。柱子使用完后要及時拆卸,以便他人使用。注意柱子拆卸后要在相應接口連接一條管道,避免污染雜質,染菌或檢測探頭由于緩沖液干涸鹽析造成損壞。 
⑹當發現壓力檢測器或pH計不準時,及時通知管理員進行校正。 ⑺運行結束后請及時保存實驗結果,并歸于各人自己目錄下,便于整理和存檔。 
三、層析柱和介質的使用: 
1.裝柱 
⑴原先在溶液中的介質通常可以用水或乙醇(20%)裝柱,干粉介質(如G25)需在水中溶脹1h以上,方可裝柱。CHTII需在200mM PB溶液中溶脹1h后,用200mM PB裝柱。 
⑵拆下柱子,清洗柱腔和管道,將位于下方的一端(較短的)接上AKTA儀器,揭下防水膜,以5~10mL/min流速排出防水膜下的氣泡,蓋上防水膜,裝上柱腔,繼續在柱腔底部注滿2cm左右的溶液,將計算好體積的介質貼壁緩慢倒入柱腔內,要防止氣泡的產生。將管道從儀器上卸下,讓溶液流出,介質隨著沉降。當介質沉降完全后,堵上下端出口。 
⑶將位于上方的一端接上儀器如⑵排去氣泡后,向柱腔內緩慢注水**上柱面,將上端插入柱腔,鎖在介質面上方約1cm處。 

相關新聞

*如果您遇到任何創銳蠕動泵產品操作或者質量問題,請及時與我們聯系。

*保定市創銳泵業有限公司保證7 * 24小時在線。

*創銳蠕動泵品牌產品具有一年保修和終身維護。

*本網站的產品圖片,型號,數據,功能,性能,電機型號,規格及其他參數僅供參考。 創銳蠕動泵可以改善上述內容。 有關詳細信息,請參閱產品手冊。 除非另有說明,否則本網站包含的數據均為創銳蠕動泵內部測試結果。

网友自拍区