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(保定創銳泵業)紙層析法測定葉綠素介紹

時間:2021-06-03 18:15 點擊:
紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法,其原理主要是利用混合物中各組分在;流動相和固定相的分配比(溶解度)的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定相(濾紙纖維常能吸20%左右的水),有機溶劑如乙醇等為流動相,色素提取液為層析試樣。把試樣點在濾紙的濾液細線位置上,當流動相溶劑在濾紙的毛細管的作用下,連續不斷地沿著濾紙前進通過濾液細線時,試樣中各組份便隨著流動相溶劑向前移動,并在流動相和固定相溶劑之間連續一次有一次的分配。結果分配比比較大的物質移動速度較快,移動距離較遠;分配比較小的物質移動較慢,移動距離較近,試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置上,從而達到分離。  
關鍵詞:紙層析,葉綠素,分離,速度  
前言:初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。葉綠體中有幾種色素。胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b隨層析液在濾紙上擴散速度不同,可以分出四條色素帶。  
材料和方法: (一)材料: 
用具:剪刀一把、干燥的定性濾紙、50ml的燒杯及100ml的燒杯各3個、白紙3張、試管架一個、研缽一個、玻璃漏斗一個、尼龍布或紗布、毛細血管一只、藥勺一個、10ml量筒一只,天平一只,試管3支、紙板一塊、棉塞3個、培養皿3個、刻度尺、注射器一只、蓋玻片    
試劑:丙酮、無水乙醇、層吸液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成)、二氧化硅、碳酸鈣、碳酸鈉    材料:新鮮的菠菜葉、青菜葉  
(二)方法和步驟: 
 1.提取綠色葉片中的色素 (1)取幾片綠色的葉片,去掉葉柄和主脈,用天平稱取 5g 葉片,剪碎,放 入研缽中。  
(2)向研缽中放入少許二氧化硅和碳酸鈣,進行充分的研磨。用量筒量取 5 ml 丙酮,倒入研缽中,迅速充分研磨。  
(3) 將研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中進行過濾。 將濾液收集到一個小試管中, 及時用棉塞將試管目塞緊。  
2.制備濾紙條 取一塊預先干燥處理過的定性濾紙,將濾紙剪成長 10 cm、寬 1cm 的濾紙 條,在距濾紙條一端 1cm 處用鉛筆畫一條細的橫線。  
3.畫濾液細線、 用毛細吸管吸取少量濾液,沿鉛筆線均勻地畫出一條細而直的濾液細線。待 濾液于后,再畫 2~3 次。  
4.分離葉綠體中的色素 將 3 mL 層析液倒入燒杯中,將濾紙條(有濾液細線的一端朝下)略微料靠著 燒杯的內壁,輕輕地插入到層析液中,隨后用培養皿蓋蓋上燒杯;(注意,不能讓濾紙上的濾液細線觸到層析液。紙層析法中所用的有機
溶劑如丙酮等,一般有揮發性、并有一定毒性,使用時要注意密封層析,避免吸入過多有害揮發物。)結果: 經過10—15分鐘后,觀察分離后色素帶的分布。**上端橙黃色為胡蘿卜素,其次
黃色為葉黃素,再下面藍綠色為葉綠素a,**后的黃綠色為葉綠素b。  
討論與分析: 
分析:紙層析法依據極性相似相容原理,是以濾紙纖維的結合水為固定相,而以有機溶劑作為流動相。由于樣品中各物質分配系數不同,因而擴散速度不同,從而達到分離的目的。一般用于葉綠體中色素的分離,葉綠體中色素主要包括胡蘿卜素、葉黃素、 

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